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氨基酸多肽:酵母细胞破壁酶解六大步骤

2023-07-19

酵母细胞破壁酶解提取氨基酸多肽是一种常用的分离纯化技术,该技术主要用于分离纯化酵母细胞中的蛋白质和氨基酸多肽。该技术的主要流程包括酵母细胞的培养、破壁、酶解、过滤、浓缩和纯化等步骤。

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1. 酵母细胞的培养

首先,需要准备优质的酵母菌株并进行培养。培养的条件包括温度、pH值、氧气含量、营养成分等,这些条件应根据菌株的特性进行调整。一般情况下,酵母菌株需要在液体培养基中进行培养,培养至对数生长期后即可进行下一步操作。

2. 酵母细胞的破壁

将培养好的酵母菌株离心收集后,用0.9%的氯化钠溶液进行洗涤,去除培养基和细胞外的残留物。然后,将洗涤好的细胞悬浮液进行破壁处理,使细胞壁裂解并释放细胞内的物质。破壁处理的方法有多种,如高压破碎法、超声波破碎法、化学破壁法等,其中高压破碎法是最常用的方法。在高压破碎法中,将细胞悬浮液置于高压均质器中进行均质,使细胞壁被破坏并释放细胞内的物质。

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3. 酶解

破壁后的酵母细胞悬浮液中含有大量的蛋白质和氨基酸多肽,需要通过酶解来提取。酶解的酶种有多种,如蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等,其中蛋白酶是最常用的酶种。酶解的条件包括温度、pH值、酶浓度、反应时间等,这些条件应根据酵母菌株的特性和需要提取的物质进行调整。一般情况下,将破壁后的酵母细胞悬浮液和蛋白酶混合后,在适当的温度和pH值下反应数小时即可。

4. 过滤

酶解后的混合物中含有大量的蛋白质和氨基酸多肽,需要通过过滤来除去杂质和未被消化的物质。过滤的方法包括压力过滤、离心过滤等,其中压力过滤是最常用的方法。在压力过滤中,将酶解后的混合物置于滤器中,通过压力将混合物中的蛋白质和氨基酸多肽过滤出来,留下杂质和未被消化的物质。

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5. 浓缩

过滤后的混合物中含有一定量的蛋白质和氨基酸多肽,但浓度较低,需要通过浓缩来提高浓度。浓缩的方法包括真空浓缩、盐析浓缩等,其中真空浓缩是最常用的方法。在真空浓缩中,将过滤后的混合物置于真空浓缩器中,通过减压将混合物中的水分蒸发掉,留下蛋白质和氨基酸多肽。

6. 纯化

浓缩后的混合物中还含有一定量的杂质和未被消化的物质,需要通过纯化来提高纯度。纯化的方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等,其中离子交换层析是最常用的方法。在离子交换层析中,将浓缩后的混合物置于离子交换树脂柱中,通过树脂上的离子交换作用将蛋白质和氨基酸多肽分离出来,留下杂质和未被消化的物质。

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通过以上流程,即可从酵母细胞中提取出纯度较高的氨基酸多肽,并用于进一步的研究和应用。